Avaliando a distribuição intracelular de conjugados de anticorpos modificados por peptídeos derivados de vírus

Comece com células eritroblásticas humanas aderidas.

Introduzir conjugados de anticorpos modificados por peptídeos derivados de vírus. Esses conjugados contêm uma sequência de localização nuclear, ou NLS, do vírus e um resíduo de ácido cólico.

Durante a incubação, os conjugados de anticorpos interagem com os receptores da superfície celular e se internalizam nos endossomos.

O ácido cólico no conjugado ajuda a escapar do compartimento endossômico, permitindo o acúmulo intracelular, enquanto as proteínas de transporte e NLS facilitam sua localização nuclear.

Introduza tripsina e tampão contendo EDTA para separar as células e remover os conjugados ligados à superfície.

Adicione meios enriquecidos com soro para inibir a atividade da tripsina.

Centrifugue para coletar as células; fixe-as e permeabilize-as.

Introduza anticorpos secundários marcados com fluoróforo vermelho-distante, ligando-se a conjugados localizados e lave.

Trate com um corante de coloração nuclear.

Observe sob um microscópio confocal e capture imagens em várias profundidades planares.

Após o processamento da imagem, a célula mostra pequenos focos fluorescentes verdes dentro do citoplasma e do núcleo, confirmando a dist