Infusão controlada de anticorpos específicos do peptídeo Aβ e oligômeros Aβ no hipocampo de ratos

Pegue um rato acordado com duas cânulas guia implantadas bilateralmente no hipocampo.

As cânulas são conectadas a bombas osmóticas implantadas por via subcutânea contendo beta-amilóide ou anticorpos específicos para Aβ e controle, respectivamente.

Uma alta concentração de anticorpos dentro da bomba induz a difusão de água do tecido circundante através de sua membrana semipermeável externa, expandindo a camada osmótica.

Essa expansão comprime o reservatório de anticorpos, facilitando a liberação controlada de anticorpos.

Conecte duas cânulas internas a cateteres estéreis cheios de água conectados a uma bomba de infusão.

Encha as cânulas com água.

Em seguida, aspire um pequeno volume de ar, criando uma bolha.

Agora, preencha as cânulas com oligômeros Aβ neurotóxicos, agregados solúveis de peptídeos Aβ.

Insira as cânulas internas nas cânulas guia. Ligue a bomba para uma entrega controlada dos oligômeros, usando a bolha de ar para evitar o refluxo e rastrear a taxa de infusão.

Administre injeções repetidas de oligômeros pela duração necessária.

O modelo está pronto para estudar as interações Oligômero-Anticorpo Aβ.

Um dia antes da instalação, encha as bombas osmóticas com anticorpo 6E10 ou anticorpo IgG1 de controle de acordo com as instruções do fabricante. Coloque as bombas em água destilada estéril e mantenha a 37 graus Celsius durante a noite para ativar as bombas.

Uma vez que o rato tenha sido anestesiado com isoflurano a 3% e raspado entre as omoplatas, desinfete a pele com uma solução de gluconato de clorexidina a 2% e álcool isopropílico a 2%. Depois de fazer uma incisão de 2 centímetros com bisturi entre as omoplatas, localize os cateteres PE-50 conectados à cânula guia.

Em seguida, corte as extremidades dos cateteres PE-50 contendo cimento dentário com um bisturi. Conecte as bombas osmóticas aos cateteres PE-50 e adicione um pouco de cimento dental na junção da bomba e do cateter para prender a conexão. Por fim, costure bem a pele com pontos 4/0. Coloque o animal de volta em sua gaiola em uma almofada térmica quente e monitore-o enquanto ele acorda da anestesia com isoflurano.

Depois de preparar a solução de oligômero beta-amilóide conforme relatado anteriormente, deixe a solução agregar-se dinâmica e espontaneamente por 1 hora à temperatura ambiente antes da infusão. Em seguida, encha cada seringa com 5 microlitros de água destilada estéril.

Em seguida, corte dois cateteres PE-50 com cerca de 60 centímetros de comprimento com um bisturi. Use duas seringas de 1 mililitro equipadas com agulhas de calibre 21 para encher ambos os cateteres com água destilada estéril. Enquanto as seringas de 1 mililitro permanecem no lugar, em uma extremidade de cada cateter, conecte as extremidades livres às seringas Hamilton. Remova as seringas de 1 mililitro e verifique se não há bolhas de ar nos cateteres.

Insira a cânula interna na extremidade dos cateteres PE-50. Use as seringas Hamilton para encher cada cânula interna até 1 microlitro e, em seguida, faça uma bolha de ar puxando o pistão para trás até a marca de 2 microlitros.

Agora misture a solução de oligômero beta-amilóide pipetando para cima e para baixo usando uma ponta de aderência mínima. Evite formar bolhas durante a mistura. Em seguida, encha ambas as cânulas internas com 1,5 microlitros de solução de oligômero beta-amilóide, puxando os pistões de volta para 3,5 microlitros.

Em seguida, marque as linhas antes e depois da bolha de ar em ambos os cateteres. Isso serve como um ponto de verificação da infusão contínua. Coloque o rato acordado em um aperto aconchegado e imobilize sua cabeça. Remova a cânula fictícia da cânula de duas guias e, em seguida, insira a cânula interna previamente preparada na cânula guia. Verifique se eles estão totalmente inseridos e bem fixados na base da cânula guia. Agora, solte o rato do aconchego e coloque-o de volta em sua gaiola para limitar o estresse de manuseio.

Ligue a bomba de infusão e injete 1 microlitro de solução de oligômero beta-amilóide a uma taxa de 0,1 microlitros por minuto. Durante a infusão, verifique se o pistão da seringa se move de 3,5 microlitros para 2,5 microlitros e se as bolhas de ar em ambos os cateteres PE-50 se movem continuamente. Verifique o rato para garantir que os cateteres não se torçam.

Deixe a cânula interna no lugar por mais 5 minutos após a infusão para permitir a difusão eficiente da solução de oligômero beta-amilóide. Após a infusão, traga o rato de volta ao porão de aconchego e remova a cânula interna e a cânula guia tampada para evitar o refluxo da solução injetada. Coloque a cânula fictícia que parou logo antes do braço angular da cânula guia. Finalmente, devolva o animal à sua gaiola.