Detecção e medição de peptídeos alvo usando um biossensor de imunossonda capacitiva

Comece com um fio de platina revestido com perfluoroalcoxi montado com uma camada de polidopamina.

Mergulhe esta sonda em uma solução contendo anticorpos específicos do peptídeo alvo, que imobilizam na polidopamina, formando uma imunossonda.

Lave e coloque a imunossonda em uma câmara de fluxo com um eletrodo de aterramento de cloreto de prata, estabelecendo um circuito.

Primeiro, introduza o buffer e aplique uma tensão para ativar a imunossonda, permitindo que ela funcione como uma bateria ou capacitor, armazenando energia como uma carga elétrica.

Registre o sinal elétrico para gerar a linha de base.

Agora, exponha o biossensor a uma solução contendo os peptídeos alvo.

Esses peptídeos se ligam aos anticorpos na sonda, causando uma alteração na carga local e na energia armazenada no biossensor.

Registre o sinal elétrico. Um aumento no sinal indica a presença do peptídeo alvo, enquanto a magnitude desse sinal se correlaciona com a concentração do peptídeo alvo.

Primeiro, corte um comprimento de 25 centímetros de fio de platina revestido com perfluoroalcoxi. Em seguida, usando um bisturi, retire aproximadamente 5 milímetros de revestimento perfluoroalcoxi de uma extremidade, tomando cuidado para não cortar o fio de platina. Agora, insira a extremidade descascada do fio de platina em um pino conector macho banhado a ouro de 1 milímetro. Em seguida, usando um alicate de ponta fina, prenda os dentes do pino do conector ao redor da extremidade descascada do fio de platina e solde o fio de platina ao pino do conector banhado a ouro.

Em seguida, prepare a solução de dopamina adicionando 50 miligramas de cloridrato de dopamina em 50 mililitros de PBS 10 milimolar, com pH 6, e misture mexendo. Depois de dissolver completamente a dopamina, coloque a ponta do fio de platina no recipiente que contém o PBS suplementado com dopamina recém-produzido. Conecte o eletrodo do disco de cloreto de prata ao canal de aterramento no estágio principal. Em seguida, coloque o disco de cloreto de prata no recipiente contendo PBS suplementado com dopamina e fio de platina.

Antes de prosseguir, conecte um shunt de fio aos canais de referência do estágio principal. Abra o software interativo de aquisição de dados e defina um protocolo de potencial de comando de eletrodeposição dente de serra definindo o potencial inicial em menos 0,6 volts, o potencial final em 0,65 volts, a taxa de varredura em 0,04 volts por segundo e a duração da deposição em 420 segundos.

Depois de completar a deposição de polidopamina, remova o pellet moído de cloreto de prata e a ponta do fio de platina do recipiente. Coloque a ponta do fio em um microtubo contendo PBS de pH 7.4 por 2 a 5 minutos e certifique-se de que a ponta do fio não entre em contato com as laterais ou a parte inferior do microtubo. Em seguida, prepare a solução de anticorpos combinando o anticorpo de interesse com o PBS de pH 7,4, na proporção de 1 para 20, em um recipiente de tamanho apropriado.

Em seguida, mergulhe a ponta depositada em polidopamina do eletrodo de platina em solução de anticorpo por duas horas em temperatura ambiente, garantindo que a ponta do fio de platina fique suspensa na solução e não apoiada na superfície interna do microtubo. Coloque a ponta funcional da imunossonda capacitiva na câmara de fluxo, tomando cuidado para não perturbar a ponta do eletrodo de forma alguma, pois isso pode danificar a ponta sensorial da sonda.

Antes do primeiro teste experimental, execute uma execução padrão TBS para condicionar a imunossonda capacitiva e, para o protocolo de tensão, defina o potencial de passo positivo para 110 milivolts, o potencial de passo negativo para menos 5 milivolts, a duração do passo de 20 milissegundos e a duração da aquisição para 600 segundos.

Em seguida, crie a solução peptídica de interesse, usando o mesmo TBS. Para manter a composição do superfusato, configure um sistema coletor onde o superfusato possa ser alternado entre TBS e TBS suplementado com peptídeos. Use os parâmetros padrão do TBS e configure o protocolo de aquisição de dados de detecção de peptídeos definindo a duração da aquisição para 360 segundos.