Um ensaio in vitro para medir a fagocitose celular dependente de anticorpos por fagócitos

Pegue microesferas marcadas com fluorescência conjugadas a um antígeno de interesse. Os antígenos imobilizados estão ligados a anticorpos específicos do antígeno.

Adicione leucócitos, incluindo linfócitos não fagocíticos, granulócitos fagocíticos e monócitos. Incubar a mistura em condições fisiológicas.

A região Fc do anticorpo imobilizado se liga ao receptor Fc no fagócito, desencadeando a fagocitose celular dependente de anticorpos, ou ADCP.

Centrifugue para pellet as células e descarte o sobrenadante contendo microesferas não internalizadas.

Adicione uma mancha de viabilidade que entre nas células mortas, marcando-as fluorescentemente.

Centrifugue para pellet as células e remova o sobrenadante.

Adicione anticorpos marcados com fluorescência que se ligam aos leucócitos.

Centrifugue para descartar o sobrenadante e fixar as células.

Usando citometria de fluxo, primeiro, elimine as células mortas que são positivas para a mancha de viabilidade.

Em seguida, selecione os leucócitos viáveis e discrimine entre granulócitos, monócitos e linfócitos com base em suas propriedades de granularidade e espalhamento.

Meça a intensidade de fluorescência das células fagocíticas positivas para micro