Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:24 min. • July 8th, 2025
Pegue um tubo contendo uma suspensão de bactérias intestinais humanas.
Adicione partículas semelhantes a vírus de norovírus humano, ou VLPs. As VLPs contêm um capsídeo viral intacto, mas não possuem RNA genômico, tornando-as não infecciosas para os seres humanos.
Durante a incubação, as proteínas do capsídeo VLP se ligam a carboidratos específicos expressos na superfície bacteriana, formando complexos VLP-bactérias.
Centrifugue para pellet os complexos e descarte os VLPs não ligados.
Introduzir uma solução de bloqueio contendo proteínas para bloquear locais de ligação de anticorpos não específicos, reduzindo a coloração de fundo nas etapas subsequentes.
Adicione anticorpos específicos para VLP marcados com fluorescência e incuba.
Os anticorpos se ligam aos seus locais-alvo no capsídeo VLP, rotulando os complexos VLP-bactérias.
Centrifugue para peletar os complexos. Descarte os anticorpos não ligados e ressuspenda o pellet em um tampão de citometria de fluxo.
Usando um citômetro de fluxo, detecte sinais de fluorescência emitidos por complexos de bactérias VLP, permitindo a quantificação da porcentagem de bactérias ligadas na amostra.
Depois de preparar os reagentes, anticorpos e bac
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