Um imunoensaio de eletroforese capilar para detecção de biomarcadores de proteínas
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 7:32 min. • July 8th, 2025
Para detectar um biomarcador de proteína associado à doença, pegue uma placa de imunoensaio.
A placa contém matrizes de separação e empilhamento pré-preenchidas necessárias para a separação de proteínas com base no tamanho.
Carregue as proteínas e os reagentes de imunoensaio em poços de placas distintos.
Inicie a execução dentro de um analisador CEI. O cartucho capilar no analisador aspira as matrizes para formar um gel dentro de cada capilar.
O capilar então aspira as proteínas. Durante a eletroforese, as proteínas migram e se separam com base em seus pesos moleculares.
O analisador introduz luz UV, imobilizando as proteínas no capilar.
O tampão de lavagem remove as matrizes e proteínas não ligadas. O buffer de bloqueio então flui, bloqueando sites de interação não específicos.
O analisador introduz anticorpos primários que se ligam ao biomarcador, seguidos por anticorpos secundários conjugados com peroxidase interagindo com os anticorpos primários.
Lave e adicione o substrato de quimioluminescência. A peroxidase oxida o substrato, emitindo luminescência.
Meça a intensidade da luminescência e compare-a com o padrão de proteína para detecção de biomarcadores.
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