Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:01 min. • July 8th, 2025
Pegue uma criossecção de tecido de carcinoma de células renais exibindo células T CD8 + infiltrantes em seu microambiente tumoral.
Trate-o com acetona para fixar e permeabilizar o tecido. Lave para remover o excesso de acetona.
Adicione avidina para saturar a biotina endógena do tecido. Em seguida, adicione biotina para bloquear os locais de ligação da avidina imobilizados, minimizando as interações não específicas.
Aplique soro contendo imunoglobulinas para bloquear os receptores Fc das células imunes, evitando a ligação inespecífica de anticorpos.
Adicione um coquetel de anticorpos primários direcionado ao CD8, um marcador de células T citotóxicas, e PD-1 e Tim-3, receptores inibitórios expressos por subpopulações de células T CD8+ resistentes à imunoterapia.
Introduzir anticorpos secundários marcados com fluoróforo distintos direcionados aos anticorpos anti-CD8 e anti-Tim-3.
Adicione anticorpos secundários biotinilados direcionados a anticorpos anti-PD-1 e uma estreptavidina marcada com fluoróforo diferente ligando-se à biotina.
Aplique um meio de montagem contendo corante nos núcleos das células de coloração e coloque uma lamínula.
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