Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
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Comece com um slide contendo células hospedeiras aderidas.
Adicione vírus e permita que eles entrem nas células hospedeiras.
Remova o meio gasto. Adicione meio fresco para permitir a síntese e o transporte de proteínas virais.
Use paraformaldeído para preservar a morfologia celular e a localização da proteína.
Adicione moléculas de detergente para tornar as células permeáveis.
Aplique um buffer de bloqueio para bloquear sites de associação não alvo.
Adicione anticorpos primários que se ligam às proteínas virais alvo. Remova os anticorpos não ligados.
Sobreposição com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo vermelho para marcação fluorescente das proteínas virais. Remova os anticorpos não ligados.
Adicione um meio de montagem contendo corante nuclear fluorescente para manchar os núcleos.
Usando microscopia confocal, observe a localização das proteínas virais fluorescentes vermelhas e dos núcleos hospedeiros fluorescentes azuis.
Um sinal vermelho mais forte ao redor da área azul indica localização citoplasmática, enquanto um sinal mais forte no interior sugere localização nuclear.
Níveis de sinal iguais dentro e ao redor da área azul indicam que as proteínas estão localizada
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