Um método in vitro para identificar células imunes inatas e adaptativas que residem em pulmões murinos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:54 min. • July 8th, 2025
Pegue o tecido pulmonar murino picado em um tampão de digestão e incube a uma temperatura fisiológica.
As enzimas tampão quebram a matriz do tecido, soltando as células.
Triturar para dissociar a massa celular e filtrar a suspensão usando um filtro para isolar as células individuais.
Centrifugue para remover o sobrenadante com restos de tecido. Incube as células com um tampão de lise para lisar os glóbulos vermelhos.
Centrifugue para descartar o sobrenadante contendo detritos celulares. Ressuspenda as células e transfira-as para uma microplaca.
Adicione anticorpos para bloquear os receptores Fc, evitando manchas de fundo.
Introduza um coquetel de anticorpos marcado com fluoróforo visando marcadores de superfície específicos nas células imunes inatas - monócitos, macrófagos, células dendríticas, células assassinas naturais, neutrófilos, eosinófilos e células imunes adaptativas - linfócitos B e T.
Fixe e permeabilize as células. Adicione anticorpos marcados com fluoróforo específicos para um marcador intracelular em monócitos, macrófagos, células dendríticas e eosinófilos.
Usando citometria de fluxo, classifique as células imunes marcadas.
Transfira o pulmão para uma placa de Petri.
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