Medindo a eficiência fagocítica de macrófagos com primaquina e terapia fotodinâmica

Comece com uma placa de vários poços contendo macrófagos murinos aderidos - ou células imunes fagocíticas.

Introduzir uma suspensão de células fúngicas de Cryptococcus, interagindo com receptores de macrófagos e internalizando via fagocitose.

O fagossomo se funde com o lisossomo, formando um fagolisossomo. O ambiente ácido do fagolisossomo favorece a sobrevivência e multiplicação dos fungos.

Introduza uma alta concentração de primaquina - um fotossensibilizador, nos poços de teste, enquanto o controle não possui o fotossensibilizador. Incubar para facilitar a absorção de primaquina pelos macrófagos.

Exponha a placa à luz ultravioleta para tratamento fotodinâmico ou PDT.

No poço de teste, a primaquina forma cátions radicais que interagem com o oxigênio molecular, produzindo espécies reativas de oxigênio, ou ROS.

As EROs induzem a morte fúngica, enquanto as enzimas antioxidantes dos macrófagos neutralizam as EROs, prevenindo danos celulares.

Permeabilize os macrófagos, liberando células fúngicas.

Espalhe o conteúdo celular diluído em placas de ágar seletivas, produzindo colônias fúngicas distintas.

Menos colônias na placa de teste em comparação com o controle indicam a eficiência fag