Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:05 min. • December 23rd, 2025
Tome diluições seriadas de anticorpos específicos para citomegalovírus humano, ou HCMV.
Ao adicionar o HCMV, os anticorpos se ligam à glicoproteína B no envelope viral, neutralizando o vírus.
Transfira a mistura para fibroblastos humanos e incuba.
Um complexo de glicoproteína trímera nos vírus não neutralizados se liga a receptores celulares específicos, desencadeando a fusão da membrana vírus-hospedeiro mediada pela glicoproteína B e liberando o nucleocapsídeo contendo DNA genômico em seu interior.
O genoma liberado entra no núcleo, codificando proteínas localizadas no núcleo imediatamente cedo, ou IE.
A neutralização de anticorpos impede a entrada viral nas células.
Remova os vírus não internalizados. Trate com etanol a uma temperatura abaixo de zero para fixar e permeabilizar as células.
Introduza um anticorpo primário que se liga às proteínas IE.
Adicione um anticorpo secundário conjugado com fluoróforo que se liga ao anticorpo primário e uma coloração fluorescente que se liga ao DNA.
Sob um microscópio, detecte células com coloração dupla infectadas por vírus. Calcule a porcentagem de células infectadas para determinar a neutralização do vírus nas diferentes concentrações de a
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