Detecção Bacteriana Quantitativa Multiplexada usando Microesferas Magnéticas Marcadas com Corante

Pegue uma placa de ensaio contendo uma mistura de microesferas de poliestireno magnético tingidas internamente com fluoróforos espectralmente diferentes.

Cada conjunto de microesferas é acoplado covalentemente a anticorpos de captura específicos de bactérias patogênicas distintas.

Adicione uma mistura bacteriana patogênica morta pelo calor. Incubar.

Os anticorpos de captura se ligam aos antígenos bacterianos alvo, formando complexos microesfera-bactéria.

Use um separador magnético para resolver complexos. Descarte as bactérias não ligadas e lave com tampão.

Adicione anticorpos tampão e de detecção biotinilados, que se ligam especificamente a bactérias ligadas à microesfera.

Separe magneticamente os complexos e lave com tampão.

Ressuspenda os complexos no buffer. Moléculas repórter de pipeta que compreendem estreptavidina acoplada a fluoróforo, que se ligam aos anticorpos de detecção biotinilados.

Separe e lave magneticamente os complexos. Ressuspenda no buffer.

Durante a análise baseada em fluxo, o primeiro laser excita os fluoróforos internos da microesfera, gerando assinaturas espectrais únicas e identificando conjuntos de microesferas únicos.

O segundo laser excita os repórteres