Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:50 min. • January 15th, 2026
Comece com um tubo contendo neutrófilos. Adicione um tampão contendo um inibidor de proteinase para evitar a degradação da proteína.
Adicione um detergente adequado para permeabilizar a membrana neutrófila
Em um banho de gelo, sonice a amostra com ondas sonoras de alta frequência para romper a membrana celular, liberando conteúdo intracelular, incluindo várias proteínas.
Centrifugue brevemente para coletar o conteúdo das paredes do tubo e transfira-o para um tubo adequado.
Introduza um agente redutor e incube em alta temperatura para promover a clivagem da ligação dissulfeto, fazendo com que as proteínas se desnaturem.
Resfrie e introduza um reagente alquilante que alquila os grupos sulfidrila.
Adicione acetona fria para induzir a precipitação de proteínas.
Centrifugue para pellet as proteínas e fragmentos celulares. Remova o sobrenadante e seque ao ar.
Introduza um tampão contendo agente desnaturante e sonice para resolubilizar o pellet de proteína.
Finalmente, adicione uma mistura de protease que cliva as proteínas. Armazene a amostra para processamento posterior.
Para começar, colete as células HL60 diferenciadas por neutrófilos em um tubo de 15 mililitros, centrifugando as amos
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