JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 4:42 min • January 15th, 2026
Pegue uma gota de urina fresca de camundongo e mergulhe uma tira de detecção de glicose contendo glicose oxidase, peroxidase e cromógeno.
A glicose oxidase oxida a glicose na urina, formando gluconolactona e peróxido de hidrogênio.
Além disso, a peroxidase utiliza peróxido de hidrogênio para catalisar a oxidação do cromogênio, formando um produto colorido, com intensidade proporcional à concentração de glicose na urina.
Compare a cor com a tabela de referência da tira para avaliação qualitativa da glicose na urina.
Para medição quantitativa da glicose na urina, pegue uma placa de vários poços com padrões de concentração de glicose e a amostra de urina de camundongo coletada durante um período definido.
Adicione uma mistura de ensaio contendo glicose oxidase, peroxidase e reagentes de acoplamento indicador.
A glicose oxidase facilita a oxidação da glicose, formando gluconolactona e peróxido de hidrogênio. A peroxidase catalisa a reação entre os reagentes de acoplamento e o peróxido de hidrogênio, formando um produto de cor rosa.
Usando um leitor de microplacas, meça a absorbância do produto colorido.
Com a curva padrão de glicose gerada, determine a concentração de glicose na urina.
Comece colocando um pedaço de parafilme limpo em uma superfície plana. Pegue suavemente o mouse pela cauda e coloque-o no parafilme.
Contenha o mouse pela nuca usando o polegar e o indicador, fazendo com que o mouse urine como resposta ao estresse. Deixe cair uma gota de urina na superfície do parafilme e depois retorne o camundongo à sua gaiola.
Mergulhe a extremidade do reagente de uma tira de detecção de glicose na gota de urina fresca. Remova imediatamente a tira e coloque-a plana sobre uma superfície com o lado da cor voltado para cima. Em seguida, aguarde pelo menos 30 segundos para que uma cor se desenvolva totalmente na tira. Compare a cor desenvolvida com a tabela de referência fornecida pelo fabricante.
Monte a gaiola metabólica de acordo com as instruções do fabricante e encha o conjunto de alimentação com ração em pó e, em seguida, prenda-a à aba de metal apropriada na câmara superior.
Prenda o suporte da garrafa de água na aba de metal restante na câmara superior. Encha a garrafa de água vazia e deslize-a no suporte da garrafa, certificando-se de que o tubo do bebedouro esteja no orifício.
Coloque um único rato na gaiola metabólica e cubra-o com a tampa, garantindo que a tampa da gaiola esteja encaixada corretamente. Posicione o tubo de coleta de urina e o tubo de coleta de fezes em seus respectivos pontos no piso da câmara inferior.
Após 24 horas, recupere o tubo de coleta de urina e faça um ensaio de glicose para determinar a concentração de glicose na urina. Se o ensaio de glicose não for realizado no mesmo dia, congele a amostra de urina em um freezer de 80 graus Celsius negativos.
Se estiver usando uma amostra de urina congelada, descongele-a primeiro. Prepare oito padrões que variam de 25 a 0 miligramas por decilitro, de acordo com as instruções do kit de ensaio.
Prepare poços padrão e poços de amostra de urina em uma placa de 96 poços, todos em duplicatas, de acordo com o manual do kit. Inicie a reação adicionando a quantidade recomendada de mistura enzimática a todos os poços. Cubra o prato e deixe incubar por 10 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, leia a absorbância de 500 a 520 nanômetros usando um leitor de placas.
Analise os dados de acordo com as instruções do kit de ensaio e trace a absorbância de cada padrão versus a concentração de glicose. Utilize este gráfico para determinar a concentração de glicose da amostra de urina de 24 horas. Se a concentração da urina estiver fora da faixa padrão, dilua a amostra de urina.