Medindo os níveis de imunoglobulina G contra uma vacina de teste em um soro de camundongo

Comece com uma placa de vários poços revestida com uma vacina de teste e bloqueie locais de interação não específicos.

Adquira uma amostra de soro de um camundongo injetado com a vacina de teste.

Este soro contém anticorpos imunoglobulina G, ou IgG, que reconhecem a vacina de teste.

Aos poços revestidos com vacina, adicione amostras de soro diluídas em série.

Os IgGs se ligam à vacina. Lave para remover anticorpos não ligados.

Adicione anticorpos secundários conjugados com peroxidase que se ligam a IgGs. Remova os anticorpos secundários não ligados.

Adicione um substrato cromogênico. A peroxidase interage com o substrato, gerando um produto de cor azul.

Introduza um ácido para interromper a reação. A mudança no pH torna a solução amarela.

Usando um espectrofotômetro, meça a intensidade da cor de cada poço para determinar a concentração de IgG na amostra de soro.

Para o revestimento de antígeno do ensaio de imunoabsorção enzimática, ou placa ELISA, dilua o antígeno da proteína HI a 10 microgramas por mililitro com solução de revestimento e adicione 100 microlitros do antígeno diluído por poço na placa ELISA. Incube a placa a 4 graus Celsius durante a noite. Após a incubação, lave a