Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:34 min. • July 8th, 2025
Comece com células de mamíferos infectadas por vírus que produzem várias caspases, incluindo caspase-3.
Adicione um meio de crescimento ao poço de controle e um meio suplementado com inibidor de caspase-3 ao poço de teste.
No poço de controle, a caspase-3 reconhece e degrada as nucleoproteínas virais e as proteínas do hospedeiro essenciais para a propagação viral.
No poço de teste, o inibidor entra na célula, inibindo a atividade da caspase-3 e impedindo a degradação da proteína.
Desalojar as células da placa. Adicione um reagente de lise e aqueça para induzir a lise celular, liberando proteínas intracelulares.
Carregue ambas as amostras em um gel de poliacrilamida SDS e eletroforese para separar as proteínas com base no tamanho.
Após a eletroforese, transfira o gel para uma membrana de borrão.
Trate a membrana com anticorpos primários contra nucleoproteínas virais e proteínas do hospedeiro.
Lave e cubra com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo ligando-se a anticorpos primários, gerando bandas fluorescentes.
A fluorescência mais alta na amostra de teste indica clivagem viral e proteica do hospedeiro mediada pela caspase-3 reduzida em comparação com o controle.
Para come
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