Isolando células T assassinas naturais invariantes de um modelo de camundongo

Comece injetando intraperitonealmente um glicolipídio sintético em um camundongo.

As células apresentadoras de antígenos, ou APCs, internalizam o glicolipídio e o apresentam por meio da molécula não clássica de MHC CD1d.

As APCs migram para o baço e interagem com as células T natural killer invariantes ou células iNKT, induzindo a ativação e proliferação de células iNKT.

Colha o baço. Dissocie-o mecanicamente para gerar uma suspensão unicelular.

Transfira as células para um tubo. Adicione um meio de gradiente de densidade e centrifugue para separar os linfócitos.

Colete os linfócitos. Adicione tetrâmeros CD1d marcados com fluoróforo carregados com antígeno glicolipídico que interagem com as células iNKT.

Remova os tetrâmeros não ligados. Sobreposição com microesferas magnéticas que se ligam aos fluoróforos ligados ao tetrâmero.

Remova os grânulos não encadernados e carregue a suspensão da célula em uma coluna magnética.

Sob o campo magnético, as células iNKT ligadas ao grânulo são retidas na coluna enquanto as células restantes fluem.

Remova a coluna do campo magnético. Adicione um tampão de eluição para eluir as células iNKT.

Injete DBA / 1 camundongo normal por via intraperitonea