Uma técnica ex vivo para fabricar células T receptoras de antígeno quimérico

Pegue as células T primárias, misturadas com esferas magnéticas conjugadas com anticorpos em um meio suplementado com interleucina-2, e incuba.

Os anticorpos se ligam ao CD3 no complexo receptor de células T e no receptor co-estimulatório CD28, enquanto a interleucina-2 se liga ao seu receptor cognato, causando ativação e proliferação de células T.

Introduza vetores lentivirais com um RNA transgênico que codifica um receptor de antígeno quimérico ou CAR e incuba.

Após a fusão da membrana vetor-célula, o RNA viral sofre transcrição reversa em DNA, integrando-se ao genoma do hospedeiro.

As células T transduzidas expressam CARs ligados à superfície.

Colha as células em intervalos definidos.

Para a criopreservação, pegue uma alíquota de células, separe as esferas amarradas pipetagem e separe-as magneticamente.

Gire as células e ressuspenda-as em um meio de criopreservação.

Congele as células e armazene-as a uma temperatura criogênica.

Para avaliar a expressão de CAR, pegue outra alíquota de células, gire as células e ressuspenda-as em um tampão.

Introduzir um anticorpo marcado com fluorescência específico para CAR e detectar a expressão de CAR usando citometria de fluxo.

Ativar células