Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:57 min. • July 8th, 2025
Comece com um tubo contendo mRNAs transcritos in vitro que codificam proteínas fluorescentes verdes.
O mRNA contém nucleotídeos modificados, trifosfato de 5-metilcitidina e trifosfato de pseudouridina, que previnem a resposta imune e aumentam a estabilidade do mRNA.
A extremidade 5' do mRNA é desfosforilada, impedindo seu reconhecimento por receptores de reconhecimento de padrões em macrófagos.
Adicione um reagente de transfecção à base de lipídios catiônicos ao mRNA, facilitando o encapsulamento do mRNA por meio de interações eletrostáticas e formando um complexo.
Introduza os complexos lipídico-mRNA em uma placa de vários poços com macrófagos primários derivados de camundongos aderidos e agite suavemente para uma mistura uniforme.
Os macrófagos internalizam o complexo contendo mRNA em um endossomo. Mais tarde, o complexo se funde com a membrana endossômica, liberando os mRNAs no citoplasma da célula.
A cauda poli-A na extremidade 3' estabiliza o mRNA que sofre síntese de proteínas para produzir proteínas fluorescentes verdes.
Sob um microscópio de fluorescência, a fluorescência verde dentro dos macrófagos sugere a transfecção bem-sucedida com mRNAs modificados.
Prepare-se para a
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