JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 2:26 min • July 8th, 2025
Pegue um camundongo imunocomprometido que possui apenas neutrófilos e monócitos como células imunes funcionais.
Injete ciclofosfamida por via intraperitoneal, uma droga que tem como alvo as células progenitoras do sistema imunológico.
A droga entra em células progenitoras imunes em proliferação ativa e reticula ácidos nucléicos, causando a morte celular. A morte das células progenitoras leva ao esgotamento das células imunológicas.
Administre dissulfiram por via oral, um medicamento que forma um aduto com a ciclofosfamida, reduzindo os efeitos colaterais induzidos pela ciclofosfamida.
Injete subcutaneamente uma mistura de células tumorais humanas e células mononucleares do sangue periférico, ou PBMCs, em uma mistura de proteínas gelatinosas adequada.
A mistura de proteínas forma um gel, imitando a matriz extracelular fisiológica, e aprisiona as células tumorais.
A depleção funcional das células imunes permite que as células tumorais proliferem e formem novos vasos sanguíneos, transformando-se em um xenoenxerto tumoral sólido.
Simultaneamente, as células T das PBMCs injetadas se infiltram no tumor.
O xenoenxerto tumoral exibe células T de crescimento e infiltrantes tumorais, estabelecendo um modelo de camundongo xenoenxerto humanizado.
Para depleção de células mieloides, administre intraperitonealmente 100 miligramas por quilograma de ciclofosfamida e administre por via oral 125 miligramas por quilograma de dissulfiram a camundongos fêmeas NOD/SCID de 6 a 8 semanas de idade uma vez ao dia durante dois dias. 24 horas após a segunda dose de ciclofosfamida e dissulfiram, ressuspenda 5 x 106 PBMC humano recém-isolado e 2,5 x 106 células de linha de células tumorais humanas em 200 microlitros de PBS mais 50% de matrigel por animal, e injetar todo o volume por via subcutânea no flanco direito de cada animal experimental. Meça e registre o volume do tumor primário 2 vezes por semana durante 4 a 6 semanas.