Inibição da autofagia baseada em siRNA em células dendríticas imaturas infectadas pelo vírus Herpes Simplex

Pegue duas cubetas de eletroporação. Uma cubeta contém um pequeno RNA interferente, ou siRNA, projetado para inibir a produção de FIP200, uma proteína indutora de autofagia.

A segunda cubeta contém um siRNA embaralhado como controle que não inibe a produção de FIP200.

Adicione células dendríticas imaturas, ou iDCs; eletroporar para a entrada celular de siRNA e, em seguida, plaquear as células.

O siRNA internalizado se liga a um complexo silenciador indutor de RNA.

O complexo com o siRNA específico para FIP200 cliva seu mRNA alvo, inibindo a produção de FIP200, enquanto os iDCs tratados com siRNA de controle produzem FIP200.

Colha as células e adicione o vírus herpes simplex. Após a fusão da membrana celular do envelope viral, o DNA liberado entra no núcleo e leva à produção de proteínas virais e nucleocapsídeos.

As proteínas virais interrompem as laminas nucleares. O FIP200 forma um complexo que desencadeia uma cascata de sinalização, induzindo a autofagia das laminas interrompidas para direcioná-las para degradação e facilitando o escape de nucleocapsídeos virais para o citoplasma.

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inibição mediada por siRNA da produção de FIP200 restringe a autofagia da lamina, impedindo o esca