JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 2:12 min • July 8th, 2025
Comece com um camundongo fêmea anestesiado em decúbito dorsal, com tumores uroteliais no epitélio da bexiga.
Prenda as patas traseiras, localize a abertura uretral e insira um cateter na bexiga do camundongo. Lave a bexiga para remover a urina.
Injete a proteína ativadora de neutrófilos Helicobacter pylori, ou HP-NAP - uma proteína bacteriana imunomoduladora.
No microambiente tumoral, o HP-NAP interage com receptores do tipo Toll nos neutrófilos e inicia uma cascata de sinalização, aumentando a expressão de citocinas pró-inflamatórias.
As citocinas desencadeiam a diferenciação de linfócitos T virgens em linfócitos T auxiliares tipo 1, ou Th1, e citotóxicos tipo 1, ou Tc1, que produzem interferon-gama.
O interferon-gama inibe a formação de novos vasos sanguíneos, limitando a disponibilidade de nutrientes e oxigênio para o tumor.
Além disso, regula positivamente as moléculas de MHC apresentadoras de antígenos tumorais nas células tumorais, facilitando a interação com as células Tc1.
Essa interação resulta na liberação de moléculas citotóxicas que induzem a morte das células tumorais, demonstrando a eficácia antitumoral do HP-NAP.
Pelo menos três dias após a injeção das células MB-49, após anestesiar o animal, cateterizar como acabamos de demonstrar e usando uma seringa de 1 mililitro com 200 a 300 microlitros de PBS estéril, lavar a urina residual da bexiga, aspirando todo o líquido.
Injete 50 microgramas de proteína ativadora de neutrófilos Helicobacter pylori ou HPNAP, por 150 microlitros de PBS na bexiga, deixando a seringa presa ao cateter para evitar vazamentos. Após uma hora, remova suavemente o cateter da uretra e coloque o camundongo em uma gaiola sob uma lâmpada de aquecimento até que ele desperte.