Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:50 min. • July 8th, 2025
Pegue células T com receptores que se ligam aos antígenos do vírus da hepatite B, ou HBV.
Injete as células T na veia da cauda de um camundongo.
Permita que as células injetadas se espalhem no fígado.
Para imitar a infecção por vírus, pegue plasmídeos que carregam o genoma do HBV.
Injete os plasmídeos rapidamente na veia da cauda, direcionando os plasmídeos para o fígado.
A força do líquido permeia o endotélio do vaso e gera poros temporários nas células.
Os plasmídeos entram na célula e sofrem síntese de RNA, produzindo mRNA que é usado para a produção de proteínas virais.
Algumas dessas proteínas atuam como antígenos virais.
As moléculas apresentadoras de antígenos transportam os antígenos virais para a superfície celular, expondo-os às células T.
Essas células imunes interagem com os antígenos virais e iniciam mecanismos para eliminar as células infectadas, inibindo a montagem e disseminação de proteínas virais.
Para a entrega hidrodinâmica de plasmídeo HPV através da veia caudal, diluir 10 microgramas de plasmídeo HPV em um equivalente de 8% da massa corporal de PBS. Carregue o plasmídeo em uma seringa de 3 mililitros equipada com uma agulha de calibre 26 de meia polegada por mouse.
Aqueça os camundongos HHD sob uma lâmpada de calor por cinco minutos para dilatar as veias da cauda e puxe cuidadosamente um mouse para um limitador de plástico. Localize uma veia da cauda lateral dilatada no terço médio da cauda e insira a agulha paralela à veia para entregar todo o volume de plasmídeo através da veia da cauda durante um período de três a cinco segundos.
Para transferência de células T CD8-positivas derivadas de iPSC específicas do antígeno viral, colete as células T CD8-positivas para iPSC no dia 22 da cultura, conforme demonstrado, e semeie as células em uma nova placa de cultura de células de 10 centímetros.
Após 30 minutos na incubadora de cultura de células, filtre as células flutuantes através de um filtro de náilon de 70 micrômetros e conte as células viáveis. Diluir vende a uma concentração de 1,5 x 107 células por mililitro de PBS.
Injete 200 microlitros de células em camundongos HHD individuais de quatro a seis semanas de idade na veia da cauda, como acabamos de demonstrar. No dia 14 após a transferência celular, execute uma entrega hidrodinâmica de plasmídeo HPV conforme demonstrado.