JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 3:52 min • July 8th, 2025
Pegue as células T reguladoras derivadas de iPSC, ou Tregs, expressando receptores específicos de ovalbumina. Injete-os na veia da cauda de um camundongo contido.
As células atingem a membrana sinovial que reveste a superfície interna da cápsula articular do joelho.
Em seguida, administre albumina de soro bovino metilado ou mBSA, emulsionado com um adjuvante.
Os adjuvantes aumentam a apresentação de mBSA para células apresentadoras de antígenos, ou APCs, que processam e apresentam os fragmentos por meio de moléculas de MHC.
As APCs migram para os linfonodos, induzindo a ativação das células T. As células T ativadas migram para a articulação do joelho.
Injete mBSA sozinho e mBSA com ovalbumina nas articulações esquerda e direita do joelho, respectivamente.
No joelho esquerdo, as APCs apresentam os fragmentos de mBSA às células T ativadas, desencadeando a liberação de citocinas pró-inflamatórias e levando a danos nos tecidos e inchaço articular, denominado artrite.
No joelho direito, as Tregs interagem com as APCs apresentadoras de ovalbumina e liberam citocinas anti-inflamatórias, reduzindo o dano tecidual e o inchaço das articulações, melhorando assim a artrite.
Comece destacando as culturas de células de interesse com tripsina e ressuspendendo cada tipo de célula em 10 mililitros de meio fresco. Coloque cada cultura de células em um novo prato de 10 centímetros e permita que as células alimentadoras adiram na incubadora de cultura de células. Após 30 minutos, colete as iPSCs flutuantes e passe as culturas por filtros de células individuais de 70 mícrons para remover os aglomerados de células para contagem.
Ressuspenda cada cultura em uma concentração de 1,5 x 107 células por mililitro em PBS frio, filtrando novamente conforme necessário. Em seguida, coloque camundongos C57BL6 fêmeas de 4 a 6 semanas, um de cada vez, em um pequeno animal de contenção e transfira adotivamente 200 microlitros de um tipo de célula por camundongo para a veia da cauda de cada animal.
Use um paquímetro para medir o inchaço de ambos os joelhos para estabelecer a medição inicial. 10 dias após a transferência celular, use uma seringa de 1 mililitro para injetar nos camundongos 100 microgramas de BSA metilado emulsionado em adjuvante completo de Freund na base da cauda de cada animal experimental.
17 dias após a transferência celular, induzir artrite por injeção intra-articular de 20 microgramas de BSA metilada em 10 microlitros de PBS na articulação do joelho esquerdo e 20 microgramas de BSA metilada, e 100 microgramas de ovalbumina total em 10 microlitros de PBS na articulação do joelho direito de cada animal anestesiado transferido adotivamente.
Sete dias após a indução da artrite, meça os joelhos novamente para calcular o aumento percentual no diâmetro do joelho e excise cirurgicamente as patelas. Fixe as juntas em formalina. Em seguida, após a descalcificação em EDTA, embutir os joelhos em parafina e obter cortes de 4 mícrons para coloração e análise histoquímica.