Uma técnica ex vivo para gerar células T receptoras de antígeno quimérico específicas para tumores

Pegue vetores retrovirais misturados com células primárias do baço.

Os vetores contêm RNA transgênico que codifica um receptor de antígeno quimérico ou CAR, que tem como alvo um antígeno específico do tumor.

A citocina interleucina-2 no meio promove seletivamente a proliferação de células T enquanto as outras células eventualmente morrem.

Transfira a mistura para uma microplaca revestida com fragmentos de fibronectina recombinante.

Centrifugue para facilitar a ligação dos fragmentos de fibronectina aos vetores e células T, mediando a interação vírus-célula hospedeira, e incubar.

Após a fusão do envelope dos vetores com a membrana celular, as enzimas virais transcrevem reversamente o RNA liberado em DNA e o incorporam ao genoma do hospedeiro.

As células T transduzidas expressam CARs ligados à superfície, consistindo em um fragmento variável de anticorpo extracelular direcionado ao antígeno específico do tumor e às regiões de sinalização intracelular para responder ao antígeno.

Ressuspenda as células antes de transferi-las para um tubo.

Centrifugue para descartar o sobrenadante contendo vírus não internalizados e ressuspenda as células em um tampão para ensaios a jusante.

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