Células T CAR geneticamente modificadas usando um sistema CRISPR-Cas9

Comece com uma suspensão de células T e trate-as com lentivírus CAR carregando um gene para o receptor de antígeno quimérico ou lentivírus CAR e CRISPR.

O lentivírus CRISPR contém genes para o RNA guia e a nuclease Cas9, bem como um gene de resistência a antibióticos.

Os lentivírus CAR e CRISPR interagem com as células T e liberam seu RNA.

Esses RNAs são transcritos reversamente e convertidos em DNA correspondente, que se integra ao DNA das células T.

Isso permite a síntese de proteínas CAR, RNAs guia e proteínas Cas9.

O RNA guia forma um complexo com Cas9, que reconhece e se liga especificamente ao gene alvo no DNA das células T.

Enquanto isso, Cas9 cliva o DNA, criando uma quebra de fita dupla.

Essa quebra é reparada por meio de junção de extremidade não homóloga, um mecanismo de reparo propenso a erros, resultando na modificação do gene alvo.

Isso gera células T geneticamente modificadas com receptores de antígenos quiméricos.

Trate as células com antibióticos para eliminar as células T não modificadas e isole seletivamente as células T CAR geneticamente modificadas.

Para interromper o fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos, utilize um RNA guia, conforme descri