Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:41 min. • July 8th, 2025
Pegue os poliplexos de transfecção contendo plasmídeos alvo ligados a um polímero. Os plasmídeos codificam um antígeno viral fundido a uma etiqueta de peptídeo e uma marca de afinidade.
Incube os poliplexos com células de mamíferos, que internalizam os poliplexos dentro dos endossomos.
O polímero induz a ruptura da vesícula. Os plasmídeos liberados expressam o antígeno viral, que é secretado extracelularmente.
Colha o sobrenadante que contém o antígeno e os contaminantes. Adicione um agente concorrente em baixa concentração.
Carregue-o em uma coluna de cromatografia de afinidade.
As marcas de afinidade se ligam à resina da coluna, imobilizando o antígeno, enquanto o agente concorrente diminui a ligação não específica.
Flua o agente concorrente em baixa concentração, removendo contaminantes fracamente ligados.
Lave com concentrações crescentes de agentes concorrentes para deslocar os antígenos fortemente ligados, eluíndo-os.
Introduza vesículas bacterianas da membrana externa, ou OMVs, com uma proteína de captura ligada à superfície e incuba.
As etiquetas de peptídeos de antígeno se ligam às proteínas capturadoras, formando uma vacina OMV com uma exibição de antígeno multivalente.
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