Gerando um modelo de pele ferida ovina ex vivo infectada com um patógeno bacteriano

Faça uma seção de biópsia de pele pré-esterilizada obtida da testa de um cordeiro em um meio livre de antibióticos.

A seção compreende uma epiderme externa e uma camada dérmica subjacente.

Remova o meio e use um tampão para lavar a seção.

Faça um corte circular na seção e remova a camada superior. Isso quebra a barreira, gerando um leito de ferida na pele.

Transfira as seções feridas para uma inserção de membrana permeável em uma placa multipoços contendo um meio livre de antibióticos.

Introduza uma suspensão de bactérias patogênicas no leito da ferida e incuba.

Durante a incubação, o leito da ferida fornece uma superfície de tecido para a fixação bacteriana e os nutrientes para apoiar o crescimento bacteriano.

Isso permite a multiplicação e disseminação da bactéria pelo leito da ferida, estabelecendo uma infecção.

Para infectar a amostra de pele, prepare uma nova placa de 24 poços com 400 microlitros de meio pré-aquecido sem antibióticos e adicione as inserções de 24 poços usando uma pinça estéril. Remova o meio das amostras de pele, lave-as com 500 microlitros de PBS estéril e remova a lavagem.

Use uma pinça estéril para segurar suavemente a amostra no fundo do poço. Use uma bióp