Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:58 min. • July 8th, 2025
Comece com plasmídeos bidirecionais que transportam cDNA que codificam certas proteínas essenciais virais de uma cepa de influenza adaptada ao frio.
Introduzir um novo conjunto de plasmídeos bidirecionais contendo hemaglutinina e cDNA de neuraminidase modificado de uma cepa diferente de influenza.
Introduza um reagente de transfecção a esta mistura e incube para formar um complexo com os plasmídeos.
Transfira esses complexos para células epiteliais humanas cultivadas para permitir a entrada do plasmídeo na célula.
Os plasmídeos bidirecionais com dois promotores em orientações opostas permitem a produção de proteínas virais e seu RNA correspondente.
Incube as células a uma temperatura mais baixa.
As proteínas virais e os RNAs virais se auto-montam para formar vírus influenza recombinantes adaptados ao frio com replicação reduzida em condições mais quentes.
Sobreposição com células MDCK com superexpressão de ácido siálico e enzimas tripsina modificadas que permitem a ligação viral e a entrada dentro das células.
Incubar na mesma temperatura para induzir a replicação e produção de novos vírus.
Centrifugar e colher os vírus vivos atenuados recombinantes da gripe, prontos para uma prepa
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