Um modelo tridimensional de co-cultura de células T infiltrantes em esferoides tumorais

Comece com uma placa de cultura contendo um molde de agarose. O molde compreende uma câmara de semeadura com múltiplos micropoços.

Cada micropoço contém um esferóide tumoral em um meio de cultura. Os esferóides são agregados tridimensionais de células tumorais.

Primeiro, remova o meio ao redor do elenco de agarose. Em seguida, remova o meio dentro do molde de um canto da câmara de semeadura para evitar a perda de esferóides.

Introduza uma suspensão de células T específicas do tumor gota a gota na câmara de semeadura, permitindo que as células se estabeleçam nos micropoços contendo os esferoides.

Em seguida, adicione um meio de cultura ao redor do molde de agarose e incube a placa em condições fisiológicas para desenvolver uma co-cultura.

Durante a incubação, as células T circundam o esferóide. Um subconjunto de células T se infiltra no esferóide, enquanto outras permanecem na periferia, estabelecendo um modelo de co-cultura tridimensional.

Para configurar uma co-cultura de células T, ressuspenda o número apropriado de células T em 190 microlitros de um meio de cultura de células T apropriado por poço e incline a placa de 12 poços para permitir a remoção do meio de cultura de célula