JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 3:33 min • July 8th, 2025
Comece com um camundongo contido sem interleucina-10, uma citocina anti-inflamatória, que resulta em inflamação do cólon.
Pegue uma seringa cheia de uma suspensão fecal rica em diversos micróbios intestinais, de um camundongo saudável.
Em seguida, conecte um tubo oral à seringa.
Insira este tubo na boca, guiando-o para baixo até o estômago do mouse.
Agora, administre a suspensão fecal diretamente no estômago, permitindo que ela atinja gradualmente o cólon.
Uma vez no cólon, os micróbios fecais se multiplicam e colonizam, restabelecendo os micróbios intestinais.
Os micróbios colonizados liberam vários metabólitos secundários.
Esses metabólitos ajudam na produção de mucina, que repara o epitélio do cólon e restaura a integridade intestinal.
Dentro do epitélio do cólon, os micróbios fecais e seus metabólitos interagem com as células imunológicas.
Essa interação faz com que as células imunes liberem citocinas anti-inflamatórias, levando a uma redução na inflamação do cólon no camundongo deficiente em interleucina-10.
Prepare uma solução estéril adicionando solução de glicerol a 10% à solução salina normal. Adicione 10 mililitros desta solução ao tubo cônico para cada grama de pellets fecais. Homogeneizar esta mistura em velocidade baixa três vezes por 30 segundos, usando um homogeneizador de bancada dentro de uma capela para ressuspender as fezes. Filtre a suspensão fecal através de duas camadas de gaze de algodão estéril. Armazene o filtrado temporariamente na geladeira por até seis horas ou embale-o em frascos criogênicos estéreis e armazene-o em um freezer de 80 graus negativos.
Limpe completamente o homogeneizador ou liquidificador seguindo um procedimento padrão. Descongele a suspensão fecal congelada no gelo se estiver usando amostras congeladas. Misture a suspensão fecal descongelada por vórtice. Transfira a suspensão fecal fresca ou descongelada para seringas de 1 mililitro. Pese os ratos e escolha o tamanho certo da agulha de gavagem e o volume máximo de dosagem.
Teste a agulha de gavagem medindo o comprimento da ponta do nariz do rato até a parte inferior do esterno. Encha a seringa com glicerol a 10% em suspensão salina ou fecal e remova as bolhas de ar dentro da seringa e da agulha. Coloque uma gaiola de rato no gabinete de biossegurança, remova a tampa plástica da gaiola e deixe o rack de metal no lugar.
Abra o rack de metal com uma mão. Pegue um mouse pela cauda e coloque-o na prateleira de metal. Segure o rato pela cauda com uma mão e use o polegar e os dedos médios da outra mão para conter o animal segurando a pele sobre os ombros. Estenda suavemente a cabeça do animal para trás e segure a cabeça no lugar com uma mão. Coloque a agulha de gavagem em cima da língua dentro da boca.
Avance suavemente ao longo do palato superior até que a agulha atinja o esôfago. Passe a agulha suavemente em um movimento. Uma vez que a agulha esteja devidamente colocada e verificada, administre lentamente o material empurrando a seringa presa à agulha. Após a dosagem, puxe suavemente a agulha para fora. Marque o mouse e devolva-o à sua gaiola inicial. Monitore o animal por 5 a 10 minutos, procurando sinais de respiração difícil ou angústia. Monitore os camundongos novamente entre 12 a 24 horas após o transplante de microbiota fecal.