Um ensaio in vitro para avaliar a atividade antitumoral de células T CAR específicas para tumores

Pegue uma placa multipoços contendo células tumorais de linfoma de células B que expressam um antígeno de superfície específico de células B e uma enzima luciferase citoplasmática.

Introduza células CAR T em poços selecionados e incuba. As células expressam receptores de antígenos quiméricos, ou CARs, compreendendo um domínio extracelular direcionado ao antígeno tumoral e aos domínios de sinalização intracelular.

O CAR se liga ao antígeno tumoral, induzindo a ativação das células T CAR.

As células ativadas liberam citocinas que promovem a atividade antitumoral das células, desencadeando a liberação de toxinas.

As toxinas entram nas células tumorais e induzem a morte celular.

Gire as células e isole o sobrenadante. Quantifique as citocinas para avaliar a atividade das células T CAR.

Ressuspenda as células em um tampão contendo luciferina, um substrato bioluminescente.

Na entrada, a luciferina é oxidada pela luciferase em células tumorais vivas, emitindo luz.

Meça a bioluminescência para identificar uma diminuição do sinal nas células tumorais tratadas, confirmando a citotoxicidade mediada por células T CAR.

Primeiro, semeie 10.000 células tumorais CD19-positivas para alvos singênico