Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:55 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo células natural killer, ou NK, e células cancerígenas. Os poços de controle contêm apenas células cancerígenas.
Centrifugue para facilitar o contato celular.
incubar. Os receptores ativadores nas células NK se ligam aos ligantes da superfície das células cancerígenas, fazendo com que as células NK liberem grânulos contendo moléculas citotóxicas.
Essas moléculas criam poros da membrana celular cancerígena e induzem a apoptose liberando conteúdo intracelular, incluindo lactato desidrogenase, ou LDH.
Adicione um detergente para lisar as células cancerígenas nos poços de controle para liberação máxima de LDH.
Centrifugue e transfira uma porção de sobrenadantes contendo LDH para uma placa de ensaio.
Adicione o reagente de ensaio e incube.
O LDH converte lactato em piruvato, reduzindo o NAD+. A diaforase usa NADH para reduzir o sal de tetrazólio, formando um produto formazan de cor vermelha.
Adicione uma solução ácida para interromper a reação enzimática.
Use um leitor de microplacas para medir a absorbância de formazan nos poços.
A intensidade do formazan é proporcional ao número de células cancerígenas lisadas no poço de teste, indicando citotox
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