Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 1:49 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo esferóides de câncer colorretal em um meio de crescimento.
Os esferoides são agregados tridimensionais de células cancerígenas que se assemelham ao microambiente fisiológico do tumor.
Remova o meio de crescimento e adicione concentrações crescentes de sobrenadante livre de células de Lactobacillus, ou LCFS, o sobrenadante de cultura obtido de uma cultura de Lactobacillus, uma bactéria do trato digestivo.
O LCFS é desprovido de células bacterianas, mas contém metabólitos ativos com atividade anticancerígena secretada pela bactéria.
Os metabólitos bacterianos no LCFS interagem com as células cancerígenas no esferoide, induzindo apoptose e levando à morte celular.
O dano às células resulta na interrupção da morfologia esferóide.
Usando um microscópio, examine os esferoides tratados com LCFS para observar um aumento na morte celular com o aumento da concentração de LCFS, indicando a atividade anticancerígena dependente da dose dos metabólitos bacterianos.
Para o tratamento com LCFS, dilua em série a solução estoque de LCFS descongelada preparada em meio de crescimento fresco para concentrações de 25%, 12,5 e 6% e use uma pipeta de 200 microlitros para remover cuidadosamente o máximo de sobrenadante possível de cada poço das culturas de linha de células de câncer colorretal plaqueadas.
Em seguida, adicione suavemente 200 microlitros do meio de crescimento suplementado com LCFS em triplicado a cada conjunto de células cancerígenas e retorne a placa à incubadora por mais 24 a 48 horas.