Uma técnica para a geração de células T CAR específicas para antígenos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:32 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de micropoços revestida com fragmentos de fibronectina recombinante e adicione células T CD8-positivas murinas ativadas.
Introduzir vetores retrovirais contendo um RNA transgênico que codifica um receptor de antígeno quimérico ou CAR.
Cubra a placa e feche-a em um saco para evitar contaminação. Centrifugue a placa em baixa velocidade para facilitar a interação vírus-célula.
A fibronectina se liga ao vírus e à célula, colocalizando-os para aumentar a transferência de genes mediada por vírus.
Pós-centrifugação, remova o saco selado e incube a placa em condições fisiológicas.
O envelope do vetor viral se funde com a membrana celular, liberando o RNA viral e as enzimas.
As enzimas virais transcrevem reversamente o RNA liberado e integram o DNA resultante no genoma do hospedeiro, permitindo que as células expressem CARs ligados à superfície.
O CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno específico para o antígeno alvo e domínios de sinalização para ativação de células T.
As células T CAR específicas do antígeno estão prontas para ensaios a jusante.
No dia 1, prepare placas revestidas com fragmentos de fibronectina humana adicionando 0,5 mililitros de fibronectina ao
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