Geração de vesículas da membrana plasmática a partir de células-tronco da medula óssea

Comece com uma cultura de células-tronco da medula óssea.

Introduza o tampão tripsina-EDTA para separar as células e quebrar os aglomerados celulares, formando uma suspensão unicelular.

Centrifugue e remova o sobrenadante. Ressuspenda o pellet com um meio fresco.

Transfira a suspensão para uma seringa e conecte-a a uma unidade de filtro de membrana.

Empurrar o êmbolo e rejeitar o meio que contém o filtrado.

Retire o filtro. Encha a seringa com um meio fresco. Conecte o filtro novamente e empurre rapidamente o êmbolo.

A pressão do líquido força a célula em direção aos poros do filtro.

Isso produz uma vesícula esférica da membrana plasmática ou PMV.

Essas vesículas contêm componentes celulares e organelas cercadas pela membrana.

Examinar o filtrado ao microscópio de contraste de fase invertido para observar as vesículas esféricas translúcidas.

As dimensões das vesículas correspondem ao tamanho dos poros da membrana do filtro, confirmando a geração de PMVs.

Para gerar os PMVs, primeiro, cultive PMSCs de camundongos em meio de cultura DMEM completo em um poço de uma placa de seis poços em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Quando as células atingi