Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:21 min. • July 8th, 2025
Pegue um tumor de melanoma murino composto por neutrófilos associados a tumores, ou TANs.
As TANs exibem atividade elevada da enzima nicotinamida fosforibosiltransferase, ou NAMPT, estimulando a angiogênese, a proliferação de vasos sanguíneos em tumores e facilitando o crescimento do tumor.
Pique o tecido e adicione enzimas para degradar a matriz do tecido, soltando as células.
Filtrar a suspensão através de um filtro e centrifugar para peletar as células.
Adicione um tampão de lise para lisar os glóbulos vermelhos e, em seguida, centrifugue e descarte o sobrenadante contendo detritos celulares.
Introduzir anticorpos para bloquear os receptores Fc celulares, evitando assim a imunomarcação inespecífica.
Introduza um coquetel de anticorpos marcado com fluoróforo específico para marcadores de superfície em TANs e um corante para discriminar células mortas.
Usando FACS, isole os TANs viáveis marcados com fluoróforo e transfira-os para uma microplaca.
Adicione um inibidor bloqueando a atividade NAMPT aos poços selecionados e incuba.
Use as células para avaliar sua capacidade de estimulação da angiogênese. As TANs tratadas com inibidores mostram angiogênese reduzida em comparação com as
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos