Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:12 min. • July 8th, 2025
Comece com uma suspensão de Mycobacterium bovis BCG, tratada com um surfactante não iônico, para evitar a aglomeração bacteriana.
Em seguida, adicione um reagente de biotinilação e incuba.
Este reagente de biotinilação, um complexo de biotina complexado a um ligante funcional, facilita a ligação de moléculas de biotina a proteínas de superfície bacteriana, marcando bactérias.
Após a incubação, centrifugue a suspensão bacteriana marcada com biotina para remover o reagente de biotinilação não reagido.
Ressuspenda as bactérias em um tampão. Adicionar uma solução de proteína de fusão de avidina, uma proteína recombinante que compreende um domínio de antigénio alvo fundido com avidina monomérica.
Durante a incubação, a avidina se liga à biotina, facilitando a modificação da superfície bacteriana com antígenos-alvo.
Centrifugue a suspensão para remover as proteínas de fusão não ligadas.
Ressuspenda as bactérias revestidas de antígeno em um tampão contendo um surfactante não iônico. O revestimento de antígeno na bactéria pode aumentar sua propriedade de desencadear respostas imunológicas.
Trabalhe em um gabinete de biossegurança usando equipamentos de proteção individual porque o BCG é um
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