Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:51 min. • July 8th, 2025
Pegue um cérebro de filhote de camundongo transgênico.
Remova o cerebelo e disseque o cérebro. Separe o tecido cortico-hipocampal contendo neurônios excitatórios que expressam proteínas fluorescentes.
Transfira o tecido para uma placa de cultura contendo tampão.
Pique o tecido e transfira-o para um tubo contendo papaína.
A papaína digere a matriz extracelular do tecido, soltando células, incluindo neurônios.
Transfira o tecido digerido para um tubo com proteínas BSA, interrompendo a atividade enzimática e evitando danos celulares.
Dissociar mecanicamente os tecidos, liberando células.
Centrifugue e remova o sobrenadante contendo detritos e enzimas.
Ressuspenda as células em meio neuronal de baixa fluorescência e filtre através de um filtro celular, removendo os agregados celulares.
Execute a classificação de células ativadas por fluorescência para identificar e classificar os neurônios fluorescentes.
Transfira os neurônios classificados para um tubo de microcentrífuga e centrífuga. Ressuspenda neurônios em meios neuronais.
Semeie neurônios em lamínulas revestidas com poli-L-lisina em uma placa de vários poços. Os neurônios aderem às superfícies revestidas.
Adicione mídia neuronal.
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