Geração de progenitores neurais a partir de células-tronco embrionárias em culturas monocamada sem soro

Comece com uma cultura de células-tronco embrionárias de camundongo.

Lave as células com um tampão para remover mídia e detritos celulares.

Adicione um coquetel de enzimas para separar as células da superfície do frasco.

Adicione meios para interromper a atividade enzimática e coletar as células em um tubo. Centrifugue e descarte o sobrenadante contendo enzimas.

Ressuspenda as células em meios de cultura neuronais sem soro.

Semeie as células em poços de placa de vários poços revestidos de gelatina.

incubar. As células-tronco embrionárias aderem à superfície revestida de gelatina. Os constituintes do meio, incluindo nutrientes, fatores de crescimento e hormônios, facilitam a proliferação celular e formam uma monocamada.

Nessa densidade celular, as células-tronco embrionárias produzem e liberam níveis ideais de fatores de crescimento e citocinas.

Essas moléculas desencadeiam vias de sinalização intracelular, facilitando a diferenciação de células-tronco embrionárias em progenitores neurais.

Misture a gelatina com 500 mililitros de PBS quente e cubra o fundo do recipiente de cultura de células com apenas o suficiente da solução para revestir a superfície. Enquanto a gelatina é revesti