Uma técnica de co-cultura para diferenciar células progenitoras neurais humanas em neurônios

Pegue uma cultura de células progenitoras neurais humanas, ou NPCs, apoiadas em uma matriz extracelular.

Os NPCs são projetados para expressar uma proteína fluorescente.

Descarte o meio e lave as células para remover qualquer meio residual.

Incube a cultura com enzimas que rompem a matriz, dissociando as células.

Transfira as células destacadas para um tubo e adicione um meio para neutralizar a ação enzimática.

Centrifugue para pellet as células, descarte o sobrenadante e ressuspenda os NPCs em um meio de diferenciação neuronal.

Transfira os NPCs para uma co-cultura estabelecida de astrócitos de camundongos e neurônios corticais de ratos.

Os fatores de crescimento liberados pela co-cultura estabelecida, juntamente com os contatos célula-célula dos NPCs com os neurônios corticais e astrócitos, promovem a diferenciação dos NPCs em neurônios maduros.

Os neurônios maduros exibem processos celulares estendidos e formam conexões sinápticas.

Sob um microscópio confocal, use o sinal das proteínas fluorescentes para visualizar os neurônios humanos derivados de NPC.

Depois de gerar células-tronco pluripotentes induzidas ou iPSCs, induza e mantenha as células como uma célula progenitora neura