Geração de Organoides Cerebrais Derivados de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas

Pegue colônias de células-tronco pluripotentes induzidas, ou iPSCs, cultivadas em uma matriz de suporte.

Adicione uma solução contendo enzimas para dissociar as colônias em células únicas.

Transfira as células para um tubo, centrifugue-as e descarte o sobrenadante.

Ressuspenda os iPSCs em um meio de crescimento.

Transfira as células para uma microplaca contendo fibras poliméricas biocompatíveis.

Centrifugue para forçar o agregado de iPSCs, formando corpos embrióides, ou EBs, no andaime de polímero.

Transição para um meio de indução neural que promove a proliferação e diferenciação de iPSC em células-tronco neurais, células progenitoras e neurônios imaturos.

Após a incubação, as células sofrem auto-organização.

Coloque os corpos embrióides em uma folha com covinhas e adicione gotas contendo proteínas da matriz extracelular.

Incubar para solidificar a matriz, incorporando os EBs.

Transfira os EBs para uma microplaca contendo um meio de manutenção neural. Incubar.

Os EBs sofrem proliferação celular para formar saliências e brotamentos e se diferenciar em neurônios maduros, formando organoides cerebrais.

Aspire o meio com uma pipeta e lave as células uma vez com DPBS. Em seguida, adici