Isolamento da microglia do córtex de um cérebro de camundongo adulto

Pegue um córtex cerebral de camundongo recém-colhido.

Corte o tecido em pequenos fragmentos. Transfira-os para um homogeneizador resfriado contendo um tampão com inibidores de RNase e DNases.

Homogeneizar o tecido de forma otimizada para liberar as células em suspensão, preservando seletivamente a microglia devido à sua capacidade de suportar forças de cisalhamento e manter a viabilidade da membrana, enquanto elimina neurônios e outras células gliais.

Além disso, os inibidores de RNase degradam as RNases, enquanto as DNases degradam qualquer DNA contaminante.

Passe a suspensão celular por um filtro de células para remover os detritos do tecido.

Transfira a suspensão celular para um tubo. Centrifugue e remova o sobrenadante contendo enzimas. Ressuspenda as células em um buffer.

Adicione microesferas magnéticas anti-mielina. Essas microesferas têm como alvo a proteína mielina, ligando-se a detritos de mielina e oligodendrócitos.

Carregar a mistura célula-grânulo numa coluna de depleção constituída por uma matriz com esferas ferromagnéticas.

Sob o campo magnético aplicado, os detritos de mielina ligados a microesferas e oligodendrócitos são retidos dentro da coluna, enquanto as célula