Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:32 min. • July 8th, 2025
Comece com monofosfato de adenosina cíclico, ou cAMP, uma molécula de sinalização que regula várias funções celulares. Adicione cAMP a uma co-cultura neurônio-macrófago.
As moléculas de cAMP do meio e os fatores de crescimento dos neurônios desencadeiam a ativação dos macrófagos.
Transferir a inserção com macrófagos ativados para outro alvéolo que contenha um meio de cultura de macrófagos.
Aqui, os macrófagos liberam citocinas e quimiocinas no meio, formando um meio condicionado ou CM.
Centrifugue o CM para pellet os componentes celulares.
Transfira o sobrenadante e o filtro para remover os detritos celulares.
Adicione o CM coletado a uma cultura neuronal. As citocinas e quimiocinas no MC coletado promovem as extensões dos neurônios.
Adicione paraformaldeído resfriado para fixar as células.
Adicione um tampão de bloqueio para evitar a ligação inespecífica de anticorpos. Lave para remover o tampão residual.
Aplique anticorpos primários que têm como alvo as proteínas do citoesqueleto dos neurônios. Lave para remover anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos secundários conjugados com fluoróforo vermelho que se ligam aos anticorpos primários. Lave para remover anticorpos não ligados
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