Cultura de neurônios murinos primários compartimentados usando chips microfluídicos de plástico

Pegue um chip microfluídico de plástico compreendendo reservatórios e compartimentos somáticos, bem como reservatórios e compartimentos axonais, conectados por microranhuras.

Adicione uma solução de pré-revestimento para saturar os compartimentos e ranhuras, evitando o aprisionamento de bolhas de ar.

Aspire a solução, deixando os compartimentos principais cheios. Lave com tampão.

Cubra os poços com um polímero sintético que facilite a adesão neuronal. Lave com tampão e adicione meio de cultura para evitar que o chip seque.

Para semear uma suspensão de neurônios do hipocampo de ratos, aspire a mídia.

Carregar a suspensão nos reservatórios somáticos. Os neurônios entram e se ligam ao compartimento somático.

Adicione meios de cultura neuronais aos poços e incuba. Os fatores de crescimento presentes na mídia facilitam o crescimento neuronal.

Gradualmente, os neurônios estendem seus axônios, que crescem no compartimento axonal através dos microsulcos.

A estreiteza dos sulcos impede a entrada de corpos celulares neuronais, garantindo a separação física das regiões somáticas e axonais.

Para começar, coloque um chip estéril com vários compartimentos em uma placa de Petri. Adicione 100 micr