Estimulando a diferenciação celular neuronal usando nanobastões de ouro

Comece com células nervosas cultivadas em um meio de diferenciação celular.

Adicione nanobastões de ouro no meio.

Incubar para permitir que a célula engula o nanobastão por meio de um processo chamado endocitose.

Estimule os nanobastões com um laser.

O feixe de laser excita os elétrons da superfície no nanobastão. Os elétrons excitados então retornam ao estado fundamental, liberando energia térmica.

Esse calor estimula as células nervosas a produzir projeções apoiadas por uma proteína específica do citoesqueleto chamada βIII-tubulina.

Remova o meio gasto.

Corrija as células. Adicione um detergente adequado para permeabilizar a membrana.

Adicione um agente bloqueador para evitar a ligação não específica de anticorpos.

Rotule as células com anticorpos primários que têm como alvo a βIII-tubulina.

Adicione anticorpos secundários marcados com fluorescência que interagem com os anticorpos primários.

Manchar o núcleo com um corante fluorescente azul.

Usando microscopia de epifluorescência, observe células vermelhas com núcleos azuis.

Projeções alongadas da célula indicam diferenciação de células nervosas.

Cultive as células neuronais NG108-15 em 10 mililitros de meio de cultura de células