Geração de culturas primárias de células ganglionares da retina a partir de embriões de peixe-zebra

Comece com embriões de peixe-zebra em estágio inicial de desenvolvimento em meios embrionários.

Remova o córion, a membrana protetora que envolve os embriões, e transfira os embriões para uma nova placa de cultura contendo meio.

Remova a parte da cauda do embrião, separe a cabeça e retire suavemente os olhos da cabeça.

Os olhos contêm a retina, uma fina camada de tecido que abriga as células ganglionares da retina.

Transfira os olhos para um tubo contendo meios de cultura de células de peixe-zebra.

Dissocie mecanicamente os olhos para liberar as células ganglionares da retina e formar uma suspensão unicelular.

Pegue lamínulas colocadas em uma placa de cultura contendo meios de cultura de peixe-zebra.

As lamínulas são revestidas com um polímero sintético e uma proteína de adesão.

Transfira as células para o centro da lamínula e incuba.

As células ganglionares da retina se ligam às superfícies revestidas e, além disso, essas células desenvolvem longas projeções chamadas axônios.

Recupere embriões de peixe-zebra da incubadora e mergulhe os embriões em uma placa de cultura de tecidos de 35 milímetros contendo 70% de etanol, por 5 a 10 segundos para esterilizá-lo. Usando uma pipeta de t