Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:06 min. • July 8th, 2025
Comece adicionando células neuronais a um meio adequado em uma placa de cultura.
Adicione nanopartículas magnéticas fluorescentes, ou MNPs, contendo um núcleo magnético marcado com um corante fluorescente.
Durante a incubação, a célula absorve o MNP por meio de endocitose e fica magnetizada.
Coloque um substrato estampado magnetizado limpo em uma placa de cultura. Este substrato de vidro incorporou padrões geométricos com propriedades magnéticas.
Esterilize o substrato expondo-o à luz ultravioleta.
Cubra o substrato com colágeno para promover a fixação celular.
Adicione as células carregadas com MNP ao substrato e incuba.
O campo magnético externo do substrato atrai as células carregadas com MNP, permitindo sua fixação.
Adicione um meio contendo um fator de crescimento específico em intervalos regulares.
O fator de crescimento auxilia as células na formação de extensões, enquanto o padrão magnético do substrato direciona a orientação dessas extensões.
Semeie 1 milhão de células em um prato regular de 35 milímetros não revestido. Adicione o volume calculado de suspensão de MNP e meio de diferenciação ao prato para atingir a concentração de MNP desejada. Misture as células, MNPs e meio de diferenciação e, em seguida, incube o prato em uma incubadora umidificada com 5% de dióxido de carbono a 37 graus Celsius por 24 horas.
Limpe o substrato padronizado com etanol a 70% e coloque-o em uma placa de cultura de 35 milímetros no exaustor. Coloque um ímã grande abaixo do substrato padronizado por um minuto e, em seguida, remova-o movendo o prato para cima e para longe e retirando o ímã do capô. Ligue a luz ultravioleta por 15 minutos.
Para preparar um substrato de vidro revestido com colágeno, dilua o colágeno tipo I na proporção de 1 para 50 em etanol a 30%. Cubra o vidro com a solução. Deixe o prato descoberto no exaustor por quatro horas até que toda a solução evapore. Em seguida, lave-o três vezes em PBS estéril. Remova as células da incubadora. Centrifugar a suspensão celular durante 5 minutos a 200 g e rejeitar o sobrenadante. Ressuspenda as células em 1 mililitro de meio de diferenciação fresco e conte as células usando um hemocitômetro.
Semeie 105 células sobre o substrato em uma placa de cultura de 35 milímetros e adicione 2 mililitros de meio de diferenciação. Incube a cultura em uma incubadora umidificada com 5% de dióxido de carbono a 37 graus Celsius. Após 24 horas, adicione 1 a 100 beta-NGF murino fresco às células. Renovar o meio de diferenciação e adicionar beta-NGF novo de dois em dois dias.