Isolamento e cultura de microglia de cérebros de ratos usando meios sem soro
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 8:59 min. • July 8th, 2025
Pegue um cérebro de rato perfundido. Pique-o em pequenos fragmentos.
Homogeneizar o tecido em um tampão para liberar células, incluindo a microglia.
Assim que o tecido não digerido assentar, colete as células contendo sobrenadante e adicione um tampão de separação de mielina.
Misture o conteúdo e centrifugue para separar as células da mielina e dos detritos. Remova a camada de detritos de mielina e o sobrenadante.
Ressuspenda as células no tampão e pipete para separar os aglomerados.
Passe a suspensão por um filtro para remover os agregados celulares restantes.
Transfira as células filtradas para uma placa de cultura revestida com anticorpos monoclonais específicos da micróglia. Incubar para facilitar a adesão da microglia.
Lave com tampão para remover as células não aderentes. Adicione tripsina e incube para soltar a microglia.
Remova a tripsina.
Adicione mídia sem soro. Incube no gelo para enfraquecer as interações célula-substrato.
Pipete e recolha a suspensão em um tubo. Centrifugue e remova o sobrenadante.
Ressuspenda a microglia em meio sem soro e transfira para uma placa de vários poços revestida de colágeno. Incubar para facilitar a adesão da microglia.
Adicione meios com f
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