Estabelecendo uma co-cultura de interneurônios com células endoteliais periventriculares

Pegue uma placa de cultura revestida com um substrato de cultura de células para facilitar a adesão celular.

O prato contém um inserto de cultura de um poço sem uma base presa ao seu centro, criando um compartimento definido. O contorno deste compartimento é marcado no prato para observar a migração celular.

Introduza uma suspensão celular no compartimento que contém células endoteliais periventriculares ou PVECs, células que revestem os vasos sanguíneos do cérebro e interneurônios que migram ao longo dos PVECs durante o desenvolvimento do cérebro.

Adicione um meio de co-cultura ao prato para manter a umidade e incube para facilitar a adesão das células ao substrato.

Remova o inserto para eliminar a barreira física; atualize o meio e incube novamente.

Os PVECs proliferam, expandindo a rede de células endoteliais além do limite da inserção.

Os PVECs secretam fatores que atuam como pistas de orientação, direcionando os interneurônios a migrar ao longo da rede PVEC.

A co-cultura exibindo migração de interneurônios está pronta para análise.

Para realizar o ensaio de co-cultura, suspender 30.000 interneurônios GABAérgicos e 30.000 células endoteliais periventriculares humanas em 70 micr