Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:44 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de cultura revestida com um substrato de cultura de células para facilitar a adesão celular.
O prato contém um inserto de cultura de um poço sem uma base presa ao seu centro, criando um compartimento definido. O contorno deste compartimento é marcado no prato para observar a migração celular.
Introduza uma suspensão celular no compartimento que contém células endoteliais periventriculares ou PVECs, células que revestem os vasos sanguíneos do cérebro e interneurônios que migram ao longo dos PVECs durante o desenvolvimento do cérebro.
Adicione um meio de co-cultura ao prato para manter a umidade e incube para facilitar a adesão das células ao substrato.
Remova o inserto para eliminar a barreira física; atualize o meio e incube novamente.
Os PVECs proliferam, expandindo a rede de células endoteliais além do limite da inserção.
Os PVECs secretam fatores que atuam como pistas de orientação, direcionando os interneurônios a migrar ao longo da rede PVEC.
A co-cultura exibindo migração de interneurônios está pronta para análise.
Para realizar o ensaio de co-cultura, suspender 30.000 interneurônios GABAérgicos e 30.000 células endoteliais periventriculares humanas em 70 microlitros de meio de co-cultura. Em seguida, semeie essa solução celular dentro de um compartimento de inserção de um poço. Após 48 horas, remova o inserto. Incube a co-cultura a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por cinco dias.